Validation analytique et clinique d’une méthode LC-MS / MS pour le leucotriène urinaire E4

La mastocytose systémique (SM) est un trouble caractérisé par l’accumulation anormale de mastocytes, qui sont typiquement responsables de réactions allergiques. Les mastocytes sont déclenchés par des antigènes uniques, ce qui signifie que chaque individu réagit différemment lorsque les mastocytes sont activés dans le corps. Par exemple, les individus peuvent être allergiques aux chats mais pas à l’herbe à poux, et ils peuvent éprouver des yeux larmoyants et un écoulement nasal ou de l’urticaire ou de l’asthme en réponse à leurs allergies spécifiques.

Une accumulation anormale de mastocytes ne provoquera pas nécessairement de symptômes, à moins qu’ils soient déclenchés, à quel point, les cellules libèrent une quantité excessive de signal allergique. Selon les tissus accumulés par les mastocytes et la manière dont ils réagissent, les symptômes peuvent aller des bouffées de chaleur, des démangeaisons, des syncopes, de la diarrhée, de la tachycardie, de la détresse gastro-intestinale ou même de la perte de conscience.

En raison de sa nature intermittente des symptômes et de la variété des symptômes possibles, le SM est difficile à diagnostiquer. L’Organisation mondiale de la santé recommande une biopsie de la moelle osseuse, des études spécialisées en cytologie ou des tests génétiques pour diagnostiquer la SM. Cependant, des concentrations urinaires de N-méthyl histamine (NMH) et de 11-bêta-prostaglandine F2α (BPG), qui sont des métabolites d’histamine et de prostaglandine dérivées des mastocytes, ont également été utilisées pour faciliter le dépistage et la réduction des biopsies inutiles. Les cystéinyl leucotriènes sont une autre classe de molécules sécrétrices de mastocytes et de médiateurs inflammatoires puissants. Le leucotriène E4 (LTE4) est le principal métabolite stable des cystéinyl leucotriènes totaux.

Les chercheurs de la Mayo Clinic ont émis l’hypothèse que LTE4 urinaire pourrait être utilisé seul ou en combinaison avec NMH et BPG pour optimiser le dépistage de la SM. Dans une étude récente publiée dans Clinical Biochemistry, les chercheurs décrivent un nouveau test (LC-MS / MS) pour quantifier précisément et précisément LTE4 dans l’urine et décrire son utilité clinique dans le dépistage SM métrorragie.

Jeffrey Meeusen, Ph.D.

“Nous avons commencé cette étude lorsque des allergologues de la Mayo Clinic nous ont contacté pour demander un biomarqueur dans la voie de l’acide arachidonique pour le dépistage du SM. Comme les symptômes SM sont intermittents et souvent non spécifiques, les cliniciens cherchaient un biomarqueur pour faciliter le dépistage avant le bilan diagnostique douloureux et coûteux », a déclaré Jeff Meeusen, Ph.D., consultant au Groupe de médecine de laboratoire cardiovasculaire à Mayo. Clinique et auteur sur le papier.

Lors de la détermination de la méthode d’étude, une méthode ELISA a été initialement évaluée, mais la LC-MS / MS a finalement été décidée.

“En utilisant une méthode ELISA, nous étions préoccupés par la spécificité analytique, car il existe une variété de composés naturels ayant une structure similaire à LTE4. Nous avons plutôt choisi d’utiliser LC-MS / MS en raison de sa sélectivité accrue, et nous avons eu l’expérience avec des tests qui mesurent des molécules similaires », a déclaré le Dr Meeusen.

Puisque les leucotriènes sont l’un des produits chimiques libérés par les mastocytes lorsqu’ils sont déclenchés, la recherche scientifique fondamentale suggère que la plupart des leucotriènes sont finalement convertis en LTE4. En collaboration avec les allergologues de la Mayo Clinic, l’équipe de recherche a recruté 400 patients présentant des symptômes qui pourraient être compatibles avec les échantillons de SM et d’urine recueillis. Les patients ont été diagnostiqués (ou non) par les moyens conventionnels. Les chercheurs ont mesuré LTE4 dans les échantillons prélevés et les ont comparés aux diagnostics cliniques.

Les résultats ont démontré que le LTE4 peut être mesuré de manière précise et reproductible dans l’urine par LC-MS / MS. Chez les patients présentant une suspicion de SM, la LTE4 urinaire élevée était sensible à 48% et spécifique à 84% à la SM. La combinaison des résultats de LTE4 avec d’autres biomarqueurs de mastocytes N-méthyl histamine et 11BPG a fourni une valeur prédictive négative de 99%.

“Nous avons développé une méthode LC-MS / MS à haut débit pour mesurer le LTE4 urinaire avec une précision, une précision et une stabilité appropriées pour les applications cliniques”, a déclaré le Dr Meeusen.

Pour plus d’informations sur le Leukotriene E4, test d’urine, visitez MayoMedicalLaboratories.com.

En Avril Josselyn