Étude longitudinale des herpèsvirus chez les receveurs de greffe de rein à Cuba

Nous avons comparé un test de réaction en chaîne par polymérase multiplex et un test de coques pour la détection de l’infection par des herpèsvirus chez des patients cubains ayant reçu des greffes de rein. Cytomegalovirus et herpesvirus humains ont été détectés chez ces patients

n vont de la fièvre et du malaise non spécifiques à la pneumonie sévère et à la choriorétinite, et, dans certains cas, l’infection peut conduire à certains types de néphrite interstitielle Les allogreffes latentes sont considérées comme les principales sources exogènes d’infection Comme d’autres herpèsvirus persister sous une forme latente chez l’hôte après l’infection primaire, qui survient habituellement au cours des premières années de la vie Parce que ce virus infecte les cellules T CD, il peut interférer avec la fonction de plusieurs composants critiques du système immunitaire HHV- a récemment été reconnu comme un agent pathogène opportuniste chez les receveurs de greffe; La plupart des infections se produisent – des semaines après la transplantation, et la reconnaissance rapide de la maladie associée au virus est importante, car HHV- est actuellement disponible. agents antiviraux Le développement d’un test de diagnostic sensible et rapide est nécessaire pour l’initiation précoce de la thérapie antivirale pour éviter les complications et la perte de l’organe transplanté [,,] Un laboratoire prospectif et une étude clinique impliquant un sous-groupe de transplantés rénaux Matériel et méthodes Nous avons observé des patients en fonction de l’âge et des années pendant les premiers mois après la transplantation rénale à l’Institut de néphrologie de La Havane, à Cuba, au cours de la période de référence. la période d’Octobre à Février Le suivi-mois inclus clini évaluations cliniques et de laboratoire Dix patients étaient des hommes et étaient des femmes; étaient blancs et étaient noirs Le consentement éclairé approprié a été obtenu, et les directives pour l’expérimentation humaine du Département américain de la Santé et des Services humains de Washington et / ou des institutions des auteurs ont été suivies dans la conduite des recherches cliniques. Les patients atteints d’insuffisance rénale avaient une glomérulonéphrite, souffraient d’hypertension artérielle, souffraient de néphrite interstitielle et souffraient d’une étiologie non précisée. Le CMV, le virus de l’herpès simplex HSV, EBV et le sérotype de l’herpèsvirus humain HHV ont été déterminés avant et après la transplantation. d’immunofluorescence indirecte pour la détection des anticorps IgG Abs À l’exception des tests sérologiques pour HHV-, pour lesquels nous avons suivi le protocole de Gao et al , les tests ont été effectués conformément à la procédure de routine. le moment de la transplantation, puis chaque semaine par la suite pendant les mois un Après transplantation Les échantillons de plasma prélevés sur chaque patient ont été analysés par PCR multiplexe pour détecter une infection herpétique, conformément à la méthode décrite par Tenorio et al ; cette méthode est capable de détecter la présence de HSV, virus varicelle-zona VZV, CMV, HHV-, et EBV en utilisant le même dosage PCR. La procédure d’extraction était également la même que celle décrite par Tenorio et al Les échantillons d’urine étaient testé pour l’excrétion de l’antigène CMV Ag, conformément à la méthode décrite par Gleaves et al Pour les receveurs de greffe, le régime immunosuppresseur consistait en une combinaison de cyclosporine mg / kg qd, d’azathioprine mg / kg qd, et prednisone mg / kg qd; Pour l’autre patient, l’anticorps monoclonal OKT a été administré. Un «épisode de rejet» a été défini comme une augmentation de% du taux de créatinine, après exclusion des diagnostics de néphrotoxicité associée à la cyclosporine et des complications urologiques, et par réponse au traitement anti- stéroïdothérapie, ou, dans le cas de rejet résistant aux stéroïdes, OKT Toutes les données cliniques ont été obtenues à partir des dossiers cliniques de chaque patient Nous avons utilisé des statistiques descriptives moyennes géométriques et pourcentages pour l’analyse Les comparaisons de fréquences pour la signification ont été effectuées en utilisant le χ testResults étaient séropositifs pour les CMV, HSV et EBV IgG Abs avant la transplantation, alors qu’aucun n’était positif pour Abs contre l’antigène nucléaire latent HHV avant et semaines après la transplantation Ainsi, tous les patients séropositifs au CMV étaient considérés comme ayant eu une réactivation de l’infection ou de la réinfection. La PCR a été utilisée, le CMV était l’herpèsvirus le plus fréquemment détecté dans les patients atteints de P & lt; L’ADN du CMV a été trouvé dans des échantillons de plasma obtenus chez% des patients étudiés et, chez les patients, l’infection par CMV était concomitante avec d’autres infections herpétiques. Co-infection par HSV chez les patients et co-infection HHV chez le patient. Chez les patients%, l’ADN du CMV a été détecté entre la deuxième et la troisième semaine après la transplantation, et chez le patient, l’ADN du CMV a été détecté une semaine après la transplantation.

Figure Vue largeDownload slideInitial détection de cytomégalovirus CMV par l’utilisation d’un PCR multiplex et un essai de fiole coquilleFigure View largeDownload Détection initiale de cytomégalovirus CMV par l’utilisation d’une PCR multiplex et un essai de flacon shellExcrétion de CMV Ag dans l’urine comme détecté avec le test de flacon shell en% de patients avec des résultats positifs de PCR multiplex, mais l’excrétion a été détectée par cette méthode – des semaines après avoir été détectée par PCR P & lt; Le nombre maximal de patients avec l’ADN de CMV détecté dans les échantillons de plasma s’est produit entre la semaine et la semaine après la figure de transplantation

Figure Vue largeDownload slidePas de patients atteints de cytomégalovirus CMV et d’herpèsvirus humain HHV-ADN détectés pendant les mois de suiviFigure View largeDownload slidePas de patients atteints de cytomégalovirus CMV et d’herpèsvirus humain HHV-ADN détectés pendant des mois de suivi Quatre patients présentaient des symptômes d’infection herpétique patients, les symptômes étaient de la fièvre, des frissons, une adénopathie, une myalgie et des céphalées, et le CMV a été détecté à la fois par la PCR multiplex et par le test du flacon d’enveloppe; Un des patients avait une infection concomitante par HHV- Cependant, pour le quatrième patient, qui présentait une infection à HHV seule, les symptômes et les signes de méningoencéphalite étaient présents. Seuls les patients présentant des symptômes ont été traités avec foscarnet mg / kg qd et tous les symptômes et signes résolus après l’achèvement du traitement Cinq patients ont présenté des épisodes de rejet d’allogreffe; Parmi eux, l’excrétion du CMV Ag et l’ADN ont été détectés. L’ADN du HSV était présent chez les patients positifs à l’infection par le CMV, mais il n’était associé à aucun symptôme.

Tableau View largeTélécharger DiapositiveDétails cliniques et symptômes cliniques chez les patients atteints d’une infection possible à herpèsvirusTable View largeTélécharger Diapositives et symptômes cliniques chez les patients atteints d’une infection herpèsvirus possibleDiscussion Des études antérieures portant sur la population cubaine et les séropositifs ont signalé une séropositivité au CMV de% avec le haut niveau de séropositivité trouvé dans notre étude et dans les études rapportées par d’autres Pour cette raison, la possibilité de réactivation ou de surinfection avec une nouvelle souche est faisable et pourrait être la cause d’une infection active l’utilisation de la PCR pour la détection d’ADN d’herpèsvirus dans les cellules ou tissus sanguins ayant une valeur limitée pour le diagnostic de l’herpèsvirus humain actif ou productif, d’autres considèrent les résultats positifs de l’analyse PCR des échantillons plasmatiques comme révélateurs de la réplication active des herpèsvirus. & lt; Par contre, Fernando et al ont étudié l’association entre l’infection à CMV détectée par PCR et le rejet cardiaque post-transplantation, et ils ont trouvé que la PCR était capable de différencier l’infection CMV latente de l’infection CMV active Cette constatation est cohérente avec nos résultats: bien que tous les patients étaient positifs pour les IgG CMV avant leur transplantation, seul le patient présentait l’ADN du CMV dans les échantillons de plasma obtenus au moment de la transplantation; les autres patients ont eu une réactivation de l’infection & gt; semaines après la transplantation En outre, les patients ont également été trouvés positifs à l’infection par le CMV par un essai de flacon d’échantillons d’urine, ce qui est considéré comme une technique fiable pour la détection de l’excrétion de CMV [,,] nous a permis de détecter simultanément et de taper HSV, VZV, CMV, HHV- et EBV ADN dans le même tube de réaction Pour cette raison, nous avons pu détecter des infections concomitantes chez le même patient En outre, parce que la détection de ces virus est effectuée avec une seule extraction d’acide nucléique et une condition d’amplification, elle est pratique et rentable pour une utilisation de routine, comparée à d’autres méthodes de PCR en une seule étape Bien qu’aucune détection d’HHV-Abs n’ait été notée, nous savons que la plupart des La population mondiale touchée est infectée par ce virus au cours des premières années de la vie . Pour cette raison, nous avons considéré que la détection de l’ADN HHV chez nos patients était indicative de la réactivation probable associée. avec un traitement immunosuppresseur ou une réinfection transmise par la greffe Les deux receveurs de greffe présentant une infection à HHV présentaient des symptômes chez un de ces patients également infectés par le CMV, ce qui est en accord avec les résultats de Chang et al. ] in: les deux études ont conclu que HHV- est un pathogène important dans l’étiologie de la fièvre et est considéré comme un virus émergent chez les receveurs de transplantation d’organe Après transplantation rénale, réactivation de l’infection par HHV et détection simultanée de l’ADN HHV et CMV Chez les patients présentant une manifestation clinique évocatrice d’une infection par le CMV, nous avons détecté de l’ADN du CMV dans des échantillons de plasma et, quelques semaines plus tard, nous avons détecté CMV Ag dans des échantillons d’urine. la PCR multiplexe était capable de détecter la réactivation du CMV à un stade plus précoce que le test du flacon d’enveloppe; cette constatation, qui a été rapportée ailleurs , a permis aux cliniciens de mettre en place un traitement précoce et spécifique. Selon la plupart des rapports, le plus grand nombre d’infections à CMV est principalement détecté & gt; Le lien entre l’infection par le CMV et le dysfonctionnement de l’allogreffe est controversé. L’infection par le CMV a été associée à un rejet d’allogreffe précoce chez les receveurs d’une transplantation rénale CMV [Pouteil-Noble et al ont étudié le rôle de l’infection par le CMV dans le rejet d’allogreffes rénales dans une cohorte de receveurs d’une greffe rénale, dont le pourcentage a développé une infection à CMV, et l’incidence de l’infection à CMV. le rejet était significativement plus élevé chez les patients ayant une infection à CMV antécédente. Avec l’utilisation de la PCR multiplex, nous avons pu détecter différents herpesvirus avec le même test, et, pour cette raison, & gt; L’herpèsvirus a pu être détecté chez un seul patient Notre étude indique la nécessité d’une analyse PCR ainsi que d’un test sérologique pour le diagnostic clinique rapide et sensible de l’infection par le CMV et le HHV