Décès infantiles associés à l’infection par le parechovirus humain au Wisconsin

Contexte De décembre à août, des tissus pulmonaires, des écouvillonnages nasopharyngés et des écouvillons de colon prélevés au cours d’autopsies de nourrissons et de jeunes enfants ont été examinés pour évaluer le rôle des virus dans les décès d’enfants âgés de moins de 18 ans. Des isolats de virus ont été identifiés par neutralisation, immunofluorescence, ou immunoenzymatique. L’ARN extrait de ces isolats et des échantillons d’autopsie associés ont été testés en utilisant la RT-PCR en temps réel par polymérase Essais de séquençage Résultats Les spécimens de% autopsies étaient positifs pour au moins un virus; Les entérovirus et les adénovirus étaient les parechovirus humains les plus fréquemment identifiés. Les HPeV ont été identifiés antigéniquement dans les isolats de tous les types HPeV et par RT-PCR dans les isolats et les multiples échantillons d’autopsie des individus décédés avec des isolats de virus non typables. = et HPeV de type n = Malgré la détection de HPeV, les décès de personnes décédées et ont été déterminées pour avoir été de causes non infectieusesConclusions Ce sont les premières détections de type HPeV et HPeV confirmées aux États-Unis. Ceci est aussi le rapport initial des cas mortels avec infection à HPeV associée Ces résultats viennent à l’appui de résultats antérieurs associant des HPeV à des maladies graves chez les jeunes enfants Des tests cliniques pour HPeVs et une surveillance HPeV systématique par des laboratoires de santé publique aideront à déterminer le fardeau de la maladie causée par les HPeVs

Les jeunes nourrissons sont exposés à une vaste gamme d’infections graves, potentiellement mortelles, en raison de l’immaturité de leur système immunitaire et de leur exposition constante à des agents pathogènes, en particulier les nouveau-nés et les autres enfants âgés de moins de 18 ans. Les causes de mortalité infantile soudaine et inexpliquée incluent le syndrome de mort subite du nourrisson, la suffocation ou la strangulation accidentelle, et la négligence, l’abandon et autres syndromes de maltraitance L’incidence annuelle de la mort subite inexpliquée des nourrissons aux États-Unis était de: décès par naissances vivantes. Pour déterminer le rôle des virus dans la mort des nourrissons et des jeunes enfants, le bureau du médecin légiste du comté de Milwaukee et la ville de Milwaukee Health. Département Laboratoire a mené une enquête à long terme impliquant l’identification du virus dans les spécimens d’autopsie d’enfants décédés âgés de & lt; Le présent rapport résume brièvement les résultats des tests de routine sur les virus chez les nourrissons décédés – et décrit en détail les données d’un sous-groupe de nourrissons dont les VPH sont isolées. Ces données fournissent des preuves supplémentaires que les parechovirus peuvent causer des maladies graves et potentiellement mortelles. nourrissons

Matériaux et méthodes

Méthodes de l’examinateur médical Des écouvillons nasopharyngés post-mortem, des prélèvements du côlon et des échantillons de tissus pulmonaires ont été obtenus de manière aseptique chez chacun des enfants décédés âgés de moins de 18 ans. mois inclus dans cette étude; Tous les spécimens ont été traités dans une enceinte de biosécurité à flux laminaire avec une technique aseptique normale et des précautions pour éviter la contamination croisée entre les spécimens. Les échantillons ont été exprimés en mL de milieu essentiel minimum contenant des antibiotiques. Portions de tissus autopsiques ont été placés dans un milieu essentiel minimum avec des antibiotiques, homogénéisés avec un broyeur de tissu stérile et centrifugés pour éliminer les débris. Tous les spécimens d’autopsie originaux non utilisés ont été conservés à – ° Isolement CVirus Echantillons cliniques mL de surnageant d’écouvillon ou homogénat de tissu clarifié ont été inoculés sur RMK primaire singe rhésus rein, épithélium HEp humain, prépuce humain HFS, poumon embryonnaire humain HEL, rein de singe vert Buffalo BGM, rein de singe Vero, adénocarcinome colique humain Caco, et cellules rénales canines MDCK Madin-Darby dans des plaques de culture cellulaire et observées jusqu’à aux jours pour l’apparition de l’effet cytopathique viral; Les cellules BGM, Caco- et Vero ont été utilisées uniquement pour les échantillons collectés à partir de virus. Les virus produisant un effet cytopathogène semblable à l’entérovirus ont été identifiés par neutralisation de l’infectiosité cellulaire par des anticorps polyclonaux spécifiques au sérotype ou par immunofluorescence indirecte avec des anticorps monoclonaux, comme décrit ailleurs. Des isolats qui n’ont pas pu être typés ont été soumis au laboratoire du Wisconsin State Laboratory of Hygiene Laboratory pour une réaction en chaîne par polymérase à entérovirus PCR et, si les tests étaient encore négatifs, les isolats de virus ont été transmis au CDC Picornavirus Laboratory Les échantillons de sérum ont été testés pour les anticorps neutralisants contre les HPeV de type HPeV. Les échantillons de sérum ont été testés pour les anticorps neutralisants contre HPeV de type HPeV. par microneutralization assa y et par immunofluorescence indirecte IFA L’isolat nasopharyngé de la descendance a été utilisé comme virus standard pour les deux dosages. Chaque échantillon a été testé en triple, le titre final étant estimé par la méthode de Spearman-Karber Pour l’IFA, HPeV- l’anticorps spécifique a été détecté à l’aide de cellules Vero infectées et de dilutions successives de sérum: à: IgG humaine a été détectée en utilisant immunoglobuline de chèvre conjuguée au FITC G Bion Enterprises Détection moléculaire de l’ARN génomique du parechovirus et extraction en temps réel de pan-parechovirus transcription PCR RT-PCR ont été réalisées comme décrit ailleurs , en utilisant le QuanTect Probe RT-PCR Kit Qiagen avec μL d’ARN pour les échantillons d’autopsie, selon les instructions du fabricant PCR Parechovirus semi-nested PCR, séquençage, et séquence l’analyse a été réalisée WAN, K Maher, MAP et MSO, données non publiées Les séquences de nucléotides décrites ici ont été déposées dans GenBank sous le numéro d’accession s Enquête FJ-FJÉpidémiologie La Division de la santé publique du Wisconsin a mené une enquête de suivi sur les décès des enfants dont HPeV était isolée. Les parents des personnes décédées ont été interrogés sur les voyages récents des membres de la famille, les maladies passées et actuelles et les contacts de chacun. En outre, les rapports de police des enquêtes sur les décès d’origine et les notes des dernières visites de santé des défunts ont été demandés.

Résultats

De décembre à août, des échantillons d’autopsie de nourrissons et de jeunes enfants ont été examinés pour détecter la présence de virus. Plus de% des enfants décédés étaient âgés. mois âge médian, mois Spécimens d’autopsies% ont eu des résultats positifs pour au moins le virus De ces derniers, il y avait des spécimens positifs; Des virus ont été détectés dans des cas, pour un total de virus uniques. Les entérovirus, les adénovirus et les rotavirus étaient les virus les plus couramment identifiés, représentant ensemble% des infections confirmées non représentées. Le cytomégalovirus et les parechovirus représentaient chacun environ Infections virales D’autres virus comprennent le virus de l’herpès simplex, le rhinovirus, les virus grippaux A et B, les virus parainfluenza humains et le virus respiratoire syncytial, et le réovirus de chaque type HEPeV a été identifié dans des échantillons provenant de% des autopsies par neutralisation avec des antisérums standard pour échovirus. Nom antérieur pour le type HPeV Les isolats provenant de défunts n’ont pas pu être identifiés par des méthodes virologiques standard. Des effets cytopathogènes de type entérovirus ont été détectés en jours sur les cellules Vero et des effets cytopathogènes sur les cellules BGM chez les poissons décédés. et n’a pas pu être identifié par des méthodes standard données de laboratoire sur les entérovirus non représentées La RT-PCR spécifique à l’entérovirus était négative dans le Wisconsin State Laboratory of Hygiene virology données de laboratoire non montrées Description des cas Décédée était une nourrisson âgée de quelques semaines ayant présenté une maladie froide, y compris fièvre, ° Au cours d’une visite à la clinique quelques jours avant la mort et après que la fièvre ait disparu, ses poumons étaient clairs et elle avait des radiographies thoraciques normales. Elle a reçu un diagnostic de rhume et a été envoyée. D’autres membres de la famille ont déclaré avoir eu une légère maladie des voies respiratoires supérieures au moment de la mort de l’enfant. Le nourrisson a été décrit comme agité lorsqu’il a été couché le soir de sa mort et a été retrouvé inconscient. L’autopsie n’a révélé aucun signe de blessure, de traumatisme ou d’autres circonstances suspectes. L’examen physique était sans particularité et les tests de dépistage toxicologique étaient négatifs. l’examen des poumons a démontré un œdème intra-alvéolaire diffus et des cellules multinucléées dispersées mais aucune inflammation significative La cause du décès a été enregistrée comme mort subite inexpliquée du nourrisson associée au syndrome viral. Il y avait une croissance modérée de Haemophilus influenzae et une légère croissance des streptocoques alpha du Ecouvillon, écouvillon nasopharyngé, écouvillon pulmonaire et tissu pulmonaire ont tous donné un effet cytopathogène viral dans le tableau des cellules Vero. L’isolat naso-pharyngé présenté au CDC a été identifié comme HPeV par VP PCR et séquençage.

Infection des voies respiratoires supérieures sans fièvre au moment du décès Le soir du décès de l’enfant, elle a été mise au lit et s’est retrouvée inconsciente, en position couchée, le lendemain matin. L’autopsie n’a révélé aucun signe de blessure, de traumatisme ou d’autres circonstances suspectes. L’examen microscopique des poumons a montré un œdème intra-alvéolaire diffus avec des cellules géantes multinucléées associées et de petites zones d’infiltrats inflammatoires chroniques de cellules inflammatoires. La cause du décès a été enregistrée comme mort subite inexpliquée associée au nourrisson. avec des modifications respiratoires légères Ecouvillon de col, écouvillon rhinopharyngé et échantillons de tissu pulmonaire ont tous produit un effet cytopathogène viral dans les cellules Vero, mais le tissu cardiaque était négatif. L’isolat du rhinopharynx soumis au CDC a été identifié comme HPeV par VP PCR et séquençage. mois âgés qui est né à semaines de gestation Elle avait respirato La détresse à la naissance et la maladie pulmonaire chronique jusqu’au moment de la mort Peu après la naissance, elle a subi une chirurgie à cœur ouvert. À l’âge de quelques mois, elle a subi une trachéotomie; En fin de compte, elle a retiré le tube de trachéotomie en présence d’une baby-sitter qui ne pouvait pas le remplacer L’enfant a été déclaré mort dans un service d’urgence d’un hôpital local L’autopsie n’a pas révéler des signes de blessure, de traumatisme, ou d’autres circonstances suspectes L’examen général était sans particularité, mais le cou avait une trachée médiane avec une trachéotomie bien établie. Les poumons étaient partiellement effondrés, mais il n’y avait pas de masses ou d’infiltrats inflammatoires évidents. Tronc pulmonaire dilaté Microscopiquement, les sections pulmonaires présentaient une congestion et un œdème La cause du décès était une asphyxie causée par l’auto-enlèvement du tube de trachéotomie La famille a rapporté qu’un frère avait des vomissements et de la diarrhée au moment de la mort du nourrisson. Effet cytopathique dans les cellules Vero, mais les tissus des poumons et de la rate et le matériel d’écouvillonnage nasopharyng Le génome de HPeV a été détecté dans les prélèvements tissulaires spléniques et nasopharyngés par RT-PCR en temps réel et dans des prélèvements rhinopharyngés, écouvillonnaires, pulmonaires et spléniques. Le patient décédé était un nourrisson de sexe masculin âgé de plusieurs mois. Il a été retrouvé sans réponse, en position assise près du lit. À l’autopsie, le défunt avait de multiples blessures contondantes à la tête, des abrasions récentes et anciennes du visage. plusieurs cicatrices du corps; L’examen microscopique des poumons et du cœur était sans particularité Un isolat a été obtenu dans des cellules Vero prélevées sur l’écouvillon du côlon, mais le tissu pulmonaire, le tissu splénique et l’écouvillon nasopharyngé ont été prélevés. Le génome de type HPeV a été détecté dans les prélèvements du rhinopharynx et du côlon par PCR PCR VP en temps réel et le séquençage a détecté le génome de type HPeV dans le tissu de la rate, le prélèvement rhinopharyngé, et Echantillons d’écouvillonnage du côlon Le tissu pulmonaire était négatif par PCR en temps réel; Sérologie Le père du défunt avait un anticorps neutralisant contre HPeV à une dilution: mais aucun anticorps n’a été détecté par IFA. Sa mère a eu des résultats négatifs pour le titre de neutralisation d’anticorps HPeV, & lt ;: ; négative par IFA, mais sa soeur, âgée de 10 ans, était HPeV-positive par titre de neutralisation, et fortement positive par titre IFA, et indique un antécédent d’infection à HPeV. Le sérum de son grand-mère était négatif au test de neutralisation mais positif par IFA Les deux parents et la sœur auraient eu une congestion nasale mais aucun autre signe de maladie aiguë au moment de la mort de l’enfant; la grand-mère n’avait aucun antécédent récent de maladie respiratoire ou de diarrhée. Le père du défunt était négatif pour le titre d’anticorps neutralisant, mais anticorps-positif par titre IFA, & sa mère et ses frères et soeurs étaient tous HPeV positifs dans les deux essais, indiquant une Antécédents d’infection par HPeV La mère et une sœur âgées de quelques années avaient des titres neutralisants de: et une sœur et un frère d’un an ont chacun des titres neutralisants de: Aucun des membres de la famille n’a rapporté d’antécédents récents de maladie respiratoire ou de diarrhée. Des échantillons de sérum ont été prélevés chez des contacts familiaux de défunts ou, en tant que témoin brut de séroprévalence HPeV dans la communauté, des échantillons de sérum précédemment soumis à des tests de virus de l’immunodéficience humaine chez des adultes de Milwaukee. le mâle, la femelle ont été aveuglés et testés pour l’anticorps HPeV par IFA et le test de neutralisation; tous les sérums étaient HPeV-négatifs dans les deux tests

Discussion

Les HPeV, membres du genre Parechovirus des Picornaviridae, provoquent un spectre de maladies similaires à celles des entérovirus humains, y compris la méningite aseptique, la gastro-entérite, l’encéphalite, les maladies respiratoires et la maladie néonatale de type septicémie HPeV a été associée à gastro-entérite, maladie respiratoire, méningite, paralysie transitoire et septicémie virale néonatale sévère au Japon , au Canada , aux Pays-Bas [, -], en Norvège , en Écosse et aux États-Unis. rapport de cas mortels associés à l’infection par HPeV Deux petites études séroépidémiologiques, au Japon et en Finlande, suggèrent que les enfants sont infectés par les HPeV tôt dans la vie, atteignant un taux élevé de séropositivité au moment où ils entrent à l’école primaire. suggère que, comme les entérovirus, de nombreuses infections à HPeV sont asymptomatiques ou subcliniques. En outre, comme les entérovirus, les HPeV peuvent également être détectées dans les échantillons de selles. Des tests sérologiques très limités sur des échantillons de sérum d’adultes de Milwaukee suggèrent que les infections par HPeV ne sont pas fréquentes dans le sud-est du Wisconsin ou que l’immunité décroissante rend les titres difficiles à détecter chez les adultesHPeV, détecté au Japon en Dans notre étude, la HPeV a été détectée dans des échantillons d’autopsie de nourrissons décédés, et dans le Wisconsin pendant une période de plusieurs mois – dans des communautés séparées par des kilomètres, ce qui suggère une circulation généralisée chez les nouveau-nés. l’est du Wisconsin et probablement une zone géographique plus étendue Il semble que la HPeV ait contribué à la mort de personnes décédées et de certains parents de personnes décédées et qu’elle présentait un anticorps détectable contre HPeV, ce qui indique une infection HPeV antérieure. Aucun lien épidémiologique commun connu n’a été identifié. les nourrissons infectés Malgré la détection de HPeV dans des spécimens de site stérile, la mort de personnes décédées a été des souches non infectieuses ont été isolées des prélèvements du côlon de toutes les personnes décédées et des prélèvements nasopharyngés et des prélèvements de tissu pulmonaire chez les sujets décédés et l’isolement du virus est généralement insensible aux HPeV , ce qui suggère que le titre viral était relativement élevé dans le matériel d’échantillon du côlon de toutes les personnes décédées et dans le tissu pulmonaire provenant des personnes décédées. Chez les personnes décédées et, les isolats ont été obtenus uniquement à partir d’échantillons non stériles du prélèvement de colon; cependant, le tissu splénique provenant à la fois des défunts et du tissu pulmonaire de la personne décédée était positif par PCR. Les cellules Vero semblent être la lignée cellulaire optimale pour l’isolement des HPeV; cependant, sensibilité améliorée, rapidité d’exécution et facilité d’utilisation suggèrent que la PCR devrait être la méthode de choix pour la détection de HPeV. Il est important d’évaluer l’association entre l’infection à HPeV et la maladie septique et la participation du système nerveux central chez les nouveau-nés et autres nourrissons L’utilisation croissante des techniques moléculaires dans le diagnostic microbien offre aux laboratoires cliniques et de santé publique des opportunités émergentes de mettre en œuvre des tests de PCR pour les HPeV, en particulier chez les jeunes enfants. Actuellement, les HPeV sont surveillées par le système national de surveillance des entérovirus NESS. Le NESS est un système de surveillance volontaire, basé sur des laboratoires, destiné à surveiller les tendances temporelles et géographiques et les sérotypes des infections à entérovirus aux États-Unis Santé publique et laboratoires privés et le rapport du laboratoire CDC Picornavirus Chaque rapport comprend des informations sur le sexe, l’âge, l’état, le type de spécimen et la date de collecte, et le sérotype d’entérovirus D’autres études sont nécessaires pour décrire les corrélats cliniques, les associations de maladies et le fardeau des infections à HPeV. la contribution des HPeV à la mort subite inexpliquée du nourrisson et à d’autres issues graves de la maladie chez les nourrissons

Remerciements

Nous apprécions la collaboration des Drs Alan Stormo et Victor Frolov Bureau du médecin légiste du comté de Milwaukee pour la réalisation de certaines autopsies Nous remercions Dr Ajaib Singh, David Bina et Barbara Voight Ville de Milwaukee Health Department Laboratory et Carol Kirk Wisconsin Laboratoire d’Etat d’Hygiène pour assistance aux analyses microbiologiques et virologiques Nous remercions également les Drs Steve Gradus de la ville de Milwaukee Health Department Laboratory et Wendi Kuhnert CDC pour leur critique du manuscrit Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits