Adénovirus est un pathogène clé dans la cystite hémorragique associée à la greffe de moelle osseuse

Cystite hémorragique tardive HC est une complication bien connue de la greffe de moelle osseuse BMT qui est principalement attribuée à l’infection par le virus BK BKV et adénovirus AdV De travers, les patients ont subi BMT, et d’entre eux développé HC échantillons d’urine testés positifs pour AdV chez les patients , dont le type de virus a été identifié Parmi les patients ayant subi une greffe de moelle osseuse allogénique, l’analyse de régression logistique a révélé que le grade de la maladie du greffon contre l’hôte était le facteur prédictif le plus significatif pour les HC P & lt; En outre, un total d’échantillons d’urine provenant de patients consécutifs ayant subi une greffe allogénique ont été examinés pour BKV, JC virus JCV et AdV au moyen d’une amplification en chaîne par polymérase. Échantillons JCV, alors que% testés positifs pour AdV Des échantillons obtenus à partir de patients avec HC, le nombre de résultats positifs pour BKV, JCV et AdV ont été, et, respectivement; le nombre de résultats positifs a augmenté à, de, et de, respectivement, lorsque nous avons ajouté d’autres échantillons obtenus de patients avec HC P & lt; , P = et P & lt; , respectivement En conclusion, il y avait une corrélation significative entre AdV et HC chez les patients que nous avons étudiés

Cystite hémorragique tardive HC est une complication fréquente chez les patients qui subissent une greffe de moelle osseuse BMT qui est principalement attribuée à une infection virale Le virus BK BKV est fréquemment isolé de ces patients et a donc été considéré comme le pathogène principal des HC Adenovirus AdV est un agent pathogène connu des HC et est considéré comme un pathogène important des HC chez les patients ayant subi une BMT Cependant, nous n’avons trouvé aucun rapport examinant simultanément l’AdV et le BKV dans les cas où l’AdV semblait être le principal agent pathogène de HC. , la possibilité restait que l’incidence de l’infection par BKV soit différente, de sorte que l’AdV serait le pathogène principal dans ces rapports. En outre, BKV et AdV sont excrétés dans l’urine quand aucun symptôme d’infection n’est présent, un fait qui peut échapper aux chercheurs et rendre difficile la distinction entre l’agent pathogène responsable et cette maladie. Cette étude examine les facteurs de risque de HC et l’importance des virus obtenus chez les patients. avec et sans HC après qu’ils ont subi BMT Nous avons également évalué la signification de JC JC virus parce que BKV et JCV sont tous deux des polyomavirus et peuvent se comporter de manière similaire, en dépit des données rapportées ailleurs qui suggèrent le contraire

Patients et méthodes

Population étudiée Les participants à l’étude étaient des patients consécutifs & gt; Les patients ont reçu soit des greffes de moelle osseuse allogénique soit des patients transplantés de cellules souches périphériques, dont des donneurs non apparentés photosensibilité. Au total, les patients ont subi un BMT autologue ou une greffe périphérique de la moelle osseuse. Les greffes de moelle osseuse Les schémas thérapeutiques ont été sélectionnés principalement en ce qui concerne les maladies primaires des patients et la source de la moelle osseuse. Les patients atteints de leucémie myéloïde aiguë et de leucémie myéloïde chronique ont été traités avec des doses de busulfan mg / kg et de cyclophosphamide L’irradiation lymphoïde totale cGy a également été utilisée pour traiter des patients ayant reçu de la moelle osseuse de donneurs non apparentés. Les patients atteints d’anémie aplasique sévère ont été traités par cyclophosphamide mg / kg et irradiation lymphoïde totale, et ceux atteints de leucémie aiguë lymphoblastique traités par cytosine. abinoside g / m et cyclophosphamide mg / kg, suivi de l’irradiation corporelle totale de cGy D’autres maladies ont été traitées avec busulfan / cyclophosphamide ou cytosine arabinoside / cyclophosphamide / irradiation corporelle totale Quatre doses de sodium-mercaptoéthane sulfonate mesna; Les patients ayant reçu une transplantation allogénique ont reçu de la cyclosporine ou du tacrolimus avec ou sans méthotrexate à court terme comme traitement prophylactique contre la maladie du greffon contre l’hôte GVHD Comme prophylaxie infection à herpèsvirus, l’acyclovir a été administré à une dose de mg / j jour après jour après que les patients ont subi une BMT Immunoglobulines ne sont pas utilisées après que le patient a subi une définition BMTD et prélèvement d’urine Exclure les patients avec HC provoqués par le régime préparatif, Seuls les patients ayant développé une hématurie macroscopique de novo après avoir subi une BMT et n’ayant pas eu de bactériurie ont été définis comme ayant une HC dans cette étude. Une analyse a été réalisée plusieurs fois par semaine. Des échantillons d’urine pour culture virale ont été obtenus chez les patients HC quelques jours après le diagnostic Des échantillons d’urine pour la PCR ont également été obtenus chez des patients consécutifs ayant subi BMT logeneic d’Avril à Décembre Ces spécimens ont été obtenus avant et une fois par semaine pendant des semaines après que les patients aient subi BMT, suivi d’échantillonnage à et après semaines BMT, si possible. De plus, les échantillons d’urine disponibles des patients avec HC ont été transplantés de juillet à Les échantillons d’urine ont été co-cultivés avec des cellules MRC, MA et Hep. Lorsque des signes cytopathologiques d’infection virale sont apparus, les cellules ont été collectées et identifiées au niveau de l’espèce en utilisant des anticorps monoclonaux contre AdV. Dennka Seiken Cultures a continué à être effectuée pendant des mois lorsque les changements pathologiques étaient absents Ces méthodes de culture ne sont pas disponibles pour détecter BKV et JCVPCR des échantillons d’urine PCR a été sélectionnée pour l’évaluation de BKV et JCV, qui ne pouvait être détectée culture virale Après sédimentation de mL d’urine à g, le surnageant a été davantage sédimenté par centrifugation ugation à, g pour h L’ADN a été extrait du culot avec du phénol-chloroforme et résolu dans des ul d’eau distillée en utilisant une aliquote de solution d’ADN et un kit de PCR Kit de PCR Premix Taq; Takara, la PCR a été réalisée avec un modèle de thermocycleur; Perkin-Elmer pour les cycles à ° C pour min, ° C pour min et ° C pour min Les oligomères utilisés pour la PCR sont présentés dans le tableau Toutes les PCR ont été effectuées avec les mêmes conditions d’amplification, avec contrôle négatif sans ADN ajouté tous les échantillons qui n’étaient pas aveuglés

Tableau View largeTélécharger slidePrimers utilisés pour PCR assaysTable Voir grandDownload slidePrimers utilisés pour les tests de PCRAdV a été détecté par Southern blot avec l’utilisation de la séquence de PCR obtenue à partir de souches de type AdV isolées chez les patients avec HC comme table de sonde La séquence de cette sonde La sensibilité de la PCR pour la détection de l’AdV a été comparée à celle de la culture pour les échantillons. Les résultats ont montré que la sensibilité de la PCR était de% et la spécificité de% par rapport à la culture. anticorps anti-Adenovirus Anticorps anti-AdV dans le sérum prétransplantation a été examiné au moyen de fixation du complément avec des échantillons de sérum prélevés chez les patients avant qu’ils subissent BMT Denka Seiken La souche de type GB de AdV a été utilisée comme antigèneAnalyse statistique STAT View, version Abacus Concepts a été utilisé pour effectuer l’analyse χ La régression logistique a été analysée à l’aide de JPM, version Institut SAS

Résultats

Analyse des patients atteints d’HC De bout en bout, les patients ont subi une greffe de cellules souches embryonnaires ou une greffe de cellules souches du sang périphérique au Tokyo Metropolitan Komagome Hospital. du HC développé en association avec la récidive locale de la leucémie et a été exclu de toute étude ultérieure. L’âge moyen était de plusieurs années, la durée moyenne entre le moment de la transplantation et la date de début était de jours, et la durée moyenne des symptômes étaient des jours, jours HC développés plus fréquemment chez les patients qui ont subi une BMT allogénique que chez ceux qui ont subi une BMT autologue ou syngénique des patients par rapport aux patients et des patients, respectivement; P = HC chez les patients ayant subi une BMT allogénique Pour évaluer les facteurs de risque de HC, nous avons examiné plusieurs facteurs notés uniquement chez les patients HC ayant subi une greffe allogénique. Un total de patients a développé HC En analyse univariée, type de donneur, maladie primaire et l’état sérologique prétransplantation pour l’anticorps anti-AdV n’a pas été corrélé avec l’incidence de HC, alors que le régime de préparation P =, GVHD prophylaxie P =, grade de GVHD aiguë P & lt; , et l’utilisation du mesna P = était en corrélation avec l’incidence de HC L’analyse de régression logistique a révélé la présence de la GVHD aiguë, ⩾ comme le facteur prédictif le plus significatif pour HC P & lt; ; OU, ; % IC, – Le type de donneur, le régime préparatoire et la prophylaxie GVHD n’étaient pas des facteurs significatifs

Tableau View largeDownload slideCaractéristiques des receveurs de greffe allogénique N = avec cystite hémorragique HC; n = Table View largeDownload slideCaractéristiques des receveurs de greffe allogénique N = avec cystite hémorragique HC; n =

Table View largeTélécharger une analyse de régressionlogistique des facteurs de risque de cystite hémorragique chez les patients ayant subi une greffe de moelle osseuse allogéniqueTable View largeTélécharger une diapositiveAnalyse de régression logistique des facteurs de risque de cystite hémorragique chez des patients ayant subi une transplantation allogénique de moelle osseuse Vingt-six des échantillons d’urine ont donné des échantillons d’urine pour la culture, dont les souches étaient de type. Les résultats des autres cultures étaient positifs pour le cytomégalovirus, mais les résultats des cultures restantes étaient négatifs. ne différait pas entre les patients qui ont été testés positifs et ceux qui ont été testés négatifs pour les données AdV non montrées ou selon la durée des symptômes P = Parmi les échantillons obtenus pour la culture chez des patients ayant subi un BMT allogénique, testés positifs pour AdV a révélé que l’incidence de HC avec AdV en corrélation avec la prophylaxie GVHD P =, grade de GVHD P =, et l’année où le patient a subi BMT P =, en utilisant l’analyse univariée L’incidence de HC sans AdV, d’autre part, était significativement plus élevée chez les patients qui reçu la moelle des donneurs non apparentés P = et parmi ceux dont le régime de prétransplantation incluait le busulfan P & lt; ; en particulier, un régime busulfan / cyclophosphamide / TLIEvaluation du virus par PCR Les échantillons d’urine ont été obtenus chez des patients consécutifs ayant eu une greffe allogénique d’avril à décembre. Un total de prélèvements urinaires ont été prélevés chez des patients avant et une fois par semaine pendant plusieurs semaines. BMT, suivie d’un échantillonnage à et semaines, si possible Trois échantillons ont été prélevés chez les patients pendant la progression de HC En outre, les échantillons d’urine disponibles chez les patients HC ayant subi une greffe de juillet à février ont été évalués par PCR et culture virale. d’entre eux étaient positifs pour l’AdV au moyen de la culture virale.Dans des échantillons prélevés chez des patients sans HC, ~% des échantillons testés positifs pour des échantillons BKV et JCV, et des échantillons% testés positifs pour des échantillons d’urine AdV obtenus de patients sans HC ne pas révéler le sang occulte dans l’analyse d’urine, à l’exception de l’échantillon qui a été obtenu d’un patient avec des antécédents de glomérulonéphrite chronique Pour les échantillons obtenus chez des patients avec HC, le nombre de résultats positifs pour BKV, JCV et AdV étaient, et, respectivement, lorsque nous avons ajouté les résultats d’autres échantillons obtenus de patients avec HC, le nombre de Ces taux d’incidence étaient significativement plus élevés que ceux des échantillons obtenus chez les patients sans HC P & lt; , P = et P & lt; , respectivement, chez les patients avec un HC AdV-négatif qui avait été révélé par PCR, le BKV a été détecté et le JCV a été détecté. Aucun autre virus n’a été détecté au moyen d’une culture virale

Discussion

dictif de l’incidence de HC chez les patients après BMT Cinquante pour cent des patients atteints de virémie BK persistante ont développé HC, alors que ceux qui n’ont pas excrété le virus BK n’ont pas développé HCB Bien que ces rapports suggèrent une relation entre BKV et HC, plusieurs autres ont montré que BKV viruria n’est pas une cause suffisante pour HC et a écarté toute relation entre les deux Azzi et al détecté BKV par PCR en% des patients après qu’ils aient subi une BMT, mais seulement% de ces patients développent HCJCV est un autre polyomavirus qui se comporte de la même manière que BKV En fait, Arthur et al ont étudié la signification de JC viruria chez les patients ayant subi un BMT Alors que BKV a été réactivé chez% des patients séropositifs au BKV, JCV a été réactivé en seulement% et aucune relation entre JCV et HC a été indiquéAdV a également été considéré comme responsable de HC chez les patients qui ont subi BMT Ce virus, en particulier le type, est l’agent causal confirmé de HC chez les enfants Miyamura et al ont rapporté que des patients ayant développé un HC après avoir subi une BMT allogénique excrété du type AdV au début de la cystite, alors que seuls des échantillons provenant de patients sans cystite ont été testés positifs pour l’AdV. L’incidence du BKV n’a pas été évaluée. Des résultats contradictoires ont été rapportés Ambinder et al ont trouvé que seulement% des patients ayant reçu une greffe de moelle osseuse étaient positifs vis-à-vis de AdV et que seuls les patients atteints de HC associée à BMT avaient AdV de type Shields et al. Les autres patients ayant développé une HC avaient une urine négative pour l’AdV, mais les résultats des cultures virales d’échantillons provenant d’autres sites étaient positifs. Plus récemment, Seber et al ont décrit des patients atteints de HC parmi les receveurs de moelle osseuse. a été trouvé chez les patients, et d’entre eux ont développé un HC sévère, mais le BKV n’a pas été recherché; Par conséquent, l’effet de ce virus sur ces patients n’a pas été déterminé. Dans notre établissement, AdV a été isolé au moyen de culture virale en% des échantillons d’urine obtenus de patients qui ont développé HC. Quatre-vingt cinq pour cent de ces isolats ont été sous-classifiés. L’incidence est assez élevée comparée à celle trouvée dans les institutions aux États-Unis, mais elle est conforme à celle notée par Miyamura et al au Japon Pour évaluer le problème plus loin, nous avons étudié BKV, JCV et AdV au moyen de PCR d’urine. échantillons provenant de patients Même s’il n’y avait aucun signe de HC ou de sang occulte dans l’urine, BKV a été détecté dans ~% des échantillons, tout comme JCV Il y avait possibilité de biais dans la sélection des patients; cependant, nous croyons toujours que ces résultats suggèrent que BKV pourrait être excrété assez fréquemment dans l’urine chez les patients qui ont subi BMT sans évidence d’hématurie ou d’autres symptômes connexes, comme indiqué ailleurs L’importance virologique de ces résultats en ce qui concerne HC reste à résoudre Comme l’ont noté Azzi et al , l’infection par BKV seule ne conduit pas forcément à l’HC chez les patients ayant subi une BMT, et d’autres facteurs pourraient être impliqués dans le développement de HC Le fait que l’incidence de JCV ne diffère pas L’incidence de l’excrétion de BKV était significativement plus élevée dans les échantillons provenant de patients atteints de HC que dans ceux obtenus de patients sans HC Cependant, la même tendance a également été observée mais n’était pas aussi significative en ce qui concerne JCV, ce qui suggère En revanche, la possibilité d’une augmentation de l’excrétion des polyomavirus au cours de HCOn, l’incidence d’AdV chez les patients sans HC était de%, alors que celle parmi L’incidence chez les patients avec HC a été confirmée par l’utilisation de différentes méthodes dans cette étude, et les résultats positifs de la culture virale étaient compatibles avec ceux de la PCR de vs car nous ne pouvions pas différencier viruria de la cystite virale confirmée pathologiquement dans cette étude, nous ne pouvions pas spécifier l’agent responsable de chaque cas de HC, même si les échantillons d’urine étaient positifs pour AdV et / ou BKV. Cependant, ces résultats étaient en accord avec ceux du rapport de Miyamura et al , ce qui suggère une forte corrélation entre l’AdV dans l’urine et la survenue de HC après BMT chez les patients avec HC sans AdV, nous n’avons pas pu identifier de pathogènes spécifiques L’incidence élevée de BKV chez ces patients peut suggérer une relation entre HC et BKV AdV-négatif, mais cette En outre, nous n’avons pu déterminer aucune raison de l’incidence élevée de l’AdV chez les patients atteints de HC dans notre établissement par rapport à ceux décrits dans d’autres L’incidence de la BKV dans l’urine exclut la possibilité d’une faible incidence d’infection par BKV dans notre population de patients. Cette divergence est due à une forte incidence d’AdV au Japon ou simplement due à des raisons méthodologiques. En conclusion, la présence d’AdV était significativement corrélée avec celle de HC dans l’urine de nos patients

Remerciements

Nous remercions Mlle K Nakamura, pour son aide dans la préparation du manuscrit, et Mlle A Hirose, pour son assistance technique